苯酚硫酸法绘制标准葡萄糖曲线
准备工作
1. 洗净称量瓶,烘干
2. 取适量葡萄糖(粉末状)至称量瓶中,烘干,至恒重(105℃)
3. 紫外可见风光光度计开启,预热20min酚怎么读
测定
1. 精确称取无水葡萄糖0.5000g,至100ml容量瓶稀释定容至,取出溶液1ml50ml容量瓶,定容。
2. 50 ml容量瓶中分别取0ml0.2 ml0.4 ml0.6 ml0.8 ml1.0 ml1.2 ml,至试管,每样需平行三次,分别加蒸馏水2 ml6%苯酚1 ml浓硫酸5 ml,振荡,置于沸水浴中加热15min,取出后在流动自来水中迅速冷却。然后紫外可见分光光度计在490nm处测吸光值。
绘制标准曲线
以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制曲线,相关系数R平方值越接近1越好。
PS
1. 其他样品多糖含量苯酚硫酸法测定,同如上所述的标准曲线测定方法,只需将不同量的葡萄糖溶液改为“加入1 ml样品(多糖溶液)、1 ml蒸馏水、6%苯酚1 ml、浓硫酸5 ml”,其他操作不变。
2. 使用浓硫酸、苯酚注意安全。
多糖得率(%)=×100
采用硫酸-苯酚法[1],将干燥的多糖溶于蒸馏水中,定容于100ml容量瓶中,用移液管吸取2ml样品装入大试管中,再往里加入6%苯酚用力冲入大试管中,摇匀,最后吸取5ml浓硫酸用力冲入大试管中,摇匀。另取2ml蒸馏水同上操作。加入苯酚和浓硫酸进行比反应,作为空白对照,30min后,用721型分光光度计于490n处下测吸光度值,并记录数据[8]