粗蔗糖中的葡聚糖
糖及糖产品
Roberts铜测定法
A原理
所有高分子量〔大于10，000道尔顿〕物质经80%的乙醇沉淀与糖分离。沉淀物经过滤，洗涤后重新溶解于水中。将碱性Cu〔Ⅱ〕试剂加入到此液中可从粗蔗糖中的其它高分子量物质中选择性地沉淀出葡聚糖。滤出该沉淀，其中的葡聚糖用比法进行测定，其原理是酚-H2SO4试剂将葡聚糖络合物分解为单体葡萄糖分子，并发生显反应，其强度正比于样品中葡聚糖的总量。样品及反应混合物应保持不受其它糖分，含碳水化合物成分杂质及对酚-H2SO4试剂有显反应成分的污染。
B仪器
B.a比计或分光光度计
在485nm测吸光度值A或透光率T。
B.b玻璃砂漏斗
粗号，孔径号C，15ml。
B.c奈氏管
35ml，或平底试管，短到能置于抽滤瓶中。
C试剂
无特殊声明时使用试剂级化学试剂。水为蒸馏水或去离子水。
C.a无水乙醇
使用无水乙醇，不要使用95%乙醇。
酚怎么读C.b80%乙醇
80ml无水乙醇中加20ml水。
C.c助滤剂
分析级，经酸洗处理过。
C.dNaOH试剂溶液
2.5N的NaOH，Na2SO4饱和。将100gNaOH溶解于水中，并稀释至1L。加无水或含结晶水的Na2SO4到有一些结晶不溶解为止。用非玻璃材料的塞子塞住后保存于试剂瓶中。试剂溶液可保存1个月。
C.eCu贮备液
将3.0gCuSO4·5H2O溶解于50ml的水中。将30.0g柠檬酸钠溶解于50ml水中。将这两种溶液混合后用水稀释至1L。溶液可保存2周。
C.fCu试剂溶液
用50ml水稀释50ml铜贮备液。将12.5g无水Na2SO4溶解于此液中。试剂应在使用的当天配制，不能保存。
C.g洗涤液
向50ml水中加入10mlCu试剂溶液及10ml2.5N的NaOH试剂溶液。
C.h5%的酚溶液
将5g纯的苯酚溶解于水中，并稀释到100ml。溶液可保存2周。
C.i葡聚糖
分子量范围不限。
C.j2NH2SO4溶液
将98g硫酸溶于水中，并稀释到1L。溶液可保存1个月。
D标准曲线的制做
对用于做标准曲线的葡聚糖应测其水分的含量，并加以校正。在称量瓶中称量500mg标准葡聚糖，并于105℃下干燥4h。在无水CaCl2保干器中冷却。称量并按下式计算水分的含量：
$$水分%＝[〔原样品重量－干样品重量〕/原样品重量]×100$$称量500mg葡聚糖〔校正水分后的重量〕，将其溶解于水中，再稀释至500ml。不要使用预先干燥的葡聚糖，因为它不易溶解。葡聚糖溶液的浓度为1mg/ml。对每一条标准曲线的测定应新配溶液。$$将100ml1.0mg葡聚糖/ml的标准溶液稀释到1L(0.1mg葡聚糖/ml)，取该液10，20，30，40，50，60，70，80，90和100ml，分别稀释到100ml来制做标准曲线。每个溶液中葡聚糖的含量分别为0.01,0.02,0.03,0.04,0.05,0.06,0.07,0.08,0.09和0.1mg/ml。$$以吸光度A或透光率T为纵坐标，葡聚糖的浓度(mg/ml)为横坐标做标准曲线。
E酚-H2SO4试验
向10支20×150mm的试管中分别加2.0ml上述10种浓度的葡聚糖标准溶液。向第11个管中加2ml水作为空白。每个管中加1ml5%的酚溶液。轻缓地摇动试管使酚与糖溶液混匀。$$向每支管中加10ml浓H2SO4，最好使用塑料的自动取滤器。迅速放入酸以保证溶液能充分混合。不要让取液器接触液面，或让酸处于溶液的表面。在一个漩涡式混合器上使溶液充分混匀。$$将一排试管放入沸水浴中2min，然后冷却30min。$$以空白做参比在比计或分光光度计上于485nm处读吸光度A或透光率T〔最好读A〕。将空白的A值调到零，然后
读样品的A值，空白和试样应使用相同比池或相匹配的池子。平行测2次计算平均值。$$为了保证测定的精确度，A值应在0.1－0.6(T>25%)之间。若A大于0.6，则应稀释后再测定。该步骤对做标准曲线时不必要，但对糖样品可能是需要的。为了制备稀溶液，从上述取2.0ml进行酚-H2SO4试验的溶液〔样品糖测定最后是25ml〕中，移取5ml到25ml容量瓶中，用水稀释至25ml。在酚-H2SO4试验中取2ml该稀释液。在最终计算葡聚糖的ppm数时应考虑一个稀释系数5。