诊治方案?支气管肺泡灌洗液细胞学检测技术规范（草案）
中华医学会呼吸病学分会
支气管肺泡灌洗（BAL）能直接获取肺内炎症免
疫效应细胞，是探讨肺局部免疫病理过程的一种比
较安全和有用的检查方法。对某些肺疾病，特别是
弥漫性间质性肺疾病（如特发性肺纤维化、结节病、
外源性过敏性肺泡炎、肺泡蛋白沉积症、风湿性疾病
伴肺纤维化和Langerhans组织细胞增生症等）、肺部
肿瘤以及免疫受损患者的肺部感染等，BAL已成为
辅助临床诊断和预后判断的重要检测手段。近20
年间支气管肺泡灌洗液（BALF）检测无论从检测范
围和检测项目上都有了长足的进展。由于BALF检
测受诸多因素的影响，如BAL操作时混血，大气道
分泌物混入，吸引负压大小，灌洗量，回收量，灌洗液
在肺内停留时间的长短以及肺泡上皮通透性的改变
等不同，所得结果亦有一定差异。因此，建立标准化
和规范化的BAL操作和BALF实验室检测程序是获
得准确结果的关键和前提。现将BAL操作及BALF
实验室检查技术做一原则规范。
支气管肺泡灌洗操作方法
一、术前准备
同纤维支气管镜（纤支镜）术前准备，常规在纤
支镜气道检查后于活检刷检前做BAL。局部麻醉剂
为2%利多卡因。
二、BAL操作技术
1.灌洗部位选择：对弥漫性间质性肺疾病选择
右肺中叶（B
4或B
5
）或左肺舌段，局限性肺病变则在
相应支气管肺段进行BAL。
2.BAL操作步骤：（1）首先在要灌洗的肺段经活检孔通过一细硅胶管注入2%利多卡因1～2ml，做灌洗肺段局部麻醉；（2）然后将纤支镜顶端紧密楔入段或亚段支气管开口处，再经活检孔通过硅胶管快速注入37℃灭菌生理盐水。每次25～50ml，总量100～250ml，一般不超过300ml；
（3）立即用50～100mm Hg（1mm Hg=0.133kPa）负压吸引回收灌洗液，通常回收率为40%～60%；（4）将回收液体立即用双层无菌纱布过滤除去粘液，并记录总量；（5）装入硅塑瓶或涂硅灭菌玻璃容器中（减少细胞粘附），置于含有冰块的保温瓶中，立即送往实验室检查。
支气管肺泡灌洗液实验室检查
一、BALF细胞总数和分类计数检测
1.将上述回收灌洗液装入塑料离心管内，在4℃下以1200r/min离心10min，上清（原液或10倍浓缩）-70℃储存，用做可溶性成分的检测。
2.经离心沉淀的细胞成分用Hank's液（不含Ca++、Mg++）在同样条件离心冲洗2次，每次
5 min。弃去上清后加Hank's液3～5ml制成细胞悬液。也可以应用灌洗原液以减少细胞丢失。
3.在改良的Neubauer计数台上计数BALF中细胞总数，一般以1×109/L表示。如果细胞数过高时，再用Hank's液稀释，调整细胞数为5×109/L，并同时将试管浸入碎冰块中备用。
4.细胞分类计数：采用细胞离心涂片装置，加入备用细胞悬液（细胞浓度为5×109/L）100μl，在4℃下以1200r/min离心10min，通过离心作用将一定数量的BALF细胞直接平铺于载玻片上。取下载玻片立即用冷风吹干，置于无水乙醇中固定30min后进行染，一般用Wright或HE染。
5.在40倍光学显微镜下计数200个细胞，进行细胞分类计数。
二、BALF中T淋巴细胞亚的检测
1.采用间接免疫荧光法，将上述获得的BALF 细胞成分，用10%小牛血清RPMI1640培养液3～5 ml制成细胞悬液。
2.将细胞悬液倒入平皿中，置于37℃5%CO2培养箱中孵育2h，进行贴壁处理，去除肺泡巨噬细胞。何冰
3.取出细胞悬液，再用Hank's液冲洗离心1次，弃上清留20～100μl。经贴壁处理后的细胞悬液中，肺泡巨噬细胞显著减少，淋巴细胞相对增多。
4.将经贴壁处理的细胞悬液分装3个小锥形离心管内，每管20～30μl，用微量加样器向标本中加单克隆抗体CD
3
、CD
4
和CD
8
各20～40μl，混匀置于4℃冰箱中作用1～2h。
5.取出标本，先用Hank's液冲洗离心2次，以12000r/min离心20s，然后加羊抗鼠荧光抗体各20～40μl，置于4℃冰箱作用30min。
6.取出标本用Hank's液以同样速度和时间离心冲洗2次，弃上清留20μl充分混匀细胞，取1滴于载玻片上加盖玻片。荧光显微镜下数200个淋巴细胞并计算出标有荧光细胞的阳性率。
几点说明
1.用于做支气管肺泡灌洗的纤支镜顶端直径应在5.5～6.0mm左右，适于紧密楔入段或亚段支气管管口，防止大气道分泌物混入和灌洗液外溢，保证BALF回收量。
2.在灌洗过程中咳嗽反射必须得到充分的抑制，否则易引起支气管壁粘膜损伤而造成灌洗液的混血，同时影响回收量。
3.1份合格的BALF标本应是：BALF中没有大气道分泌物混入；回收率>40%，存活细胞占95%以上；红细胞<10%（除外创伤/出血因素），上皮细胞<3%～5%；涂片细胞形态完整，无变形，分布均匀。
4.由于BALF中可溶性成分检测受诸多检测因
素影响，如灌注量和回收量，肺泡上皮通透性等，致使肺泡衬液稀释度亦有所不同。尽管在做BALF可溶性成分检测时采用内或外标记物进行标化，但检测结果仍存在着差异，其临床价值有限，故本草案未做有关BALF液性成分检测方法的规范。
5.本规范不适于少量液体做支气管冲洗（BL）和全肺灌洗技术的操作。
6.健康非吸烟者BALF细胞学检测正常参考值：
（1）细胞总分数：细胞总数（0.9～0.26）×109/L，其中肺泡巨噬细胞0.93±0.03，淋巴细胞0.07±0.01，中性和嗜酸细胞均<0.01。（2）T淋巴细胞亚
：总T细胞（CD+
3
）0.7，T辅助细胞（CD+
4
）0.5，T抑
制细胞（CD+
8
）0.3，CD+
4
/CD+8比值1.5～1.8。
（收稿日期：2002-04-04）
（本文编辑：韩锟）
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