ImageJ实⽤技巧——荧光明场图⽚合并和分割(基本功能篇)拍免疫荧光或者荧光转染的时候,⼀定会遇到不同颜⾊荧光照⽚合并与分割,以及荧光和明场照⽚的合并问题。
虽然⼤部分情况下,拍照软件会完成这⼀⼯作,但如果想对某⼀颜⾊的图⽚进⾏修改,然后再合并,或者提取某⼀个通道的照⽚,这时候就需要ImageJ了。
ImageJ中的这⼀功能较为基础,不需要插件,作为基础功能篇的第⼀篇,主要介绍怎么利⽤ImageJ对荧光照⽚合并、分割,以及荧光与明场之间合并。
⼀、不同荧光照⽚合并、分割
(1)合并
1、打开待合并的图像
三张不同颜⾊的荧光图像
2、合并不同颜⾊通道(Image-Color-Merge Channels)
弹出Merge Channels界⾯:
总共有7个颜⾊通道,每个颜⾊选择对应的照⽚,点击OK。出现合并后的图像(Composite)。
但这时候的合并图像只是三个8-bit的Stacks,如果要保存的话需要把图像转换为RGB模式。
左右调节⼯具条,发现左上⾓的颜⾊信息会变,但是图⽚依然是合并后图像
Tips:如果想要更改某⼀颜⾊通道,可以使⽤Channels Tool(Image-Color-Channels Tool),选择不同通道后,对单⼀通道进⾏修改,不影响其他通道。
选择不同Channel,可以呈现不同颜⾊
3、⽣成RGB的合并图像(Image-Color-Stack to RGB)
⽣成⼀张命名为Composite的RGB图像:
命名为Composite的RGB图像
注意:这⾥⼀定要Stack to RGB,否则保存后的图⽚并不是Merge后的状态。
4、保存图⽚(File-Save)
相册里图片怎么合并成一张图
(2)分割
1、打开⼀张RGB图像
2、将RGB图像转换为Composite图像(Image-Color-Make Composite)
这时候三种颜⾊通道都已经分离出来了。这⼀步是为了后⾯能直接分割出三个带有伪彩的通道。如果直接Split
Channels,也会得到三个通道,但是没有伪彩。
(3)分离不同颜⾊通道的图⽚(Image-Color-Split Channels)
(4)分别保存图像(File-Save)
⼆、荧光与明场之间合并
做siRNA、慢病毒等转染实验时,需要统计细胞的转染效率。同⼀视野下,分别拍摄荧光和明场的照⽚,这时候就需要将荧光和明场照⽚合并,易于计算带有荧光标记的细胞。
1、打开荧光和明场图像
2、合并不同颜⾊通道(Image-Color-Merge Channels)
与荧光照⽚合并的唯⼀不同是:明场照⽚选择gray通道:
Tips:如果荧光较弱,可以单独对荧光照⽚增加亮度和对⽐度(Image -> Adjust -> Brightness/Contrast)。
3、⽣成RGB的合并图像(Image-Color-Stack to RGB)
4、保存图⽚(File-Save)