作者：孙卉 康蒙 陈玉凤 禤其晴
来源：《食品安全导刊》2022年第11期
摘 要：目的：评价6种火龙果果皮的多酚含量及其抗氧化活性。方法：采用超声辅助有机溶剂提取法提取多酚，测定其总酚、黄酮、原花青素含量，通过1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力、2，2’-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基清除能力和铁离子还原能力来测定抗氧化能力。结果：6种火龙果果皮提取液中越南1号的总酚、原花青素含量最高，分别为（181.7±4.9） μg·mL-1、（124.7±3.6） μg·mL-1，而黔白1号总黄酮含量最高，为（222.1±12.3） μg·mL-1。抗氧化实验中，越南1号抗氧化活性最强，DPPH及ABTS清除率分别为97.3%和69.5%；FRAP为0.859。结论：白肉火龙果果皮中多酚类化合物的含量及抗氧化能力均高于红肉火龙果果皮；越南1号火龙果果皮具有更高的多酚类化合物和抗氧化活性。
关键词：火龙果果皮；多酚；黄酮；原花青素；抗氧化活性
Study on Polyphenols and Antioxidant Activity of Hylocereus undulates Britt Peel
SUN Hui， KANG Meng， CHEN Yufeng， XUAN Qiqing
（College of Leisure and Health， Guilin Tourism University， Guilin 541006， China）
Abstract： Objective： To evaluate the contents of polyphenols and antioxidant activities in six Pitaya peels. Method： Polyphenols were extracted by ultrasonic assisted organic solvent extraction， and the contents of total phenols， flavonoids and proanthocyanidins were determined. The antioxidant capacity was determined by 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl free radical scavenging capacity， 2，2’-azino-bis （3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid） ammonium salt free radical scavenging capacity and ferric reducing ability of plasma. Result： Among the 6 kinds of Hylocereus undulates Britt peel extracts， Vietnam No.1 had the highest content of total phenol and procyanidins， which were （181.7±4.9） μg·mL-1， （124.7±3.6） μg·mL-1， while Qianbai No.1 had the highest total flavone content （222.1±12.3） μg·mL-1. In the anti-oxidation experiment， Vietnam No.1 had the strongest anti-oxidation activity， and the scavenging rates of DPPH and ABTS were 97.3% and 69.5%， respectively; FRAP was 0.859. Conclusion： The content of polyphenols and antioxidant capacity in white Hylocereus undulates Britt peel are higher than that in red Hylocereus undulates Britt peel. In comparison， Vietnam No.1 Hylocereus undulates Britt peel has higher polyphenols and antioxidant activity.
Keywords： Hylocereus undulates britt peel; polyphenols; flavonoids; proanthocyanidins; antioxidant activity
火龙果（Hylocereus undulates Britt），仙人掌科，柱状仙人掌亚科量天尺属，又名青龙果、玉龙果。我国主要种植区域有广西、海南、贵州和云南等地，根据果皮果肉颜差异分为红皮红肉、红皮白肉、黄皮白肉三大类，其中以红皮白心和红皮红心系列为佳[1-4]。研究发现火龙果含有丰富的多酚、花青素和甜菜红素等多种活性成分，在抗氧化、降血糖、降高血压和预防结肠癌等方面具有良好的功效[5-7]。目前，火龙果果肉的开发应用主要有果汁[8]、果茶、果酱[9]、果酒[10-12]、酸奶[13-14]、果醋[15]、酵素[16]和饼干[17]等。火龙果果皮是果实加工中的副产物，占整个火龙果的25%左右[18]。研究表明，其酚类、黄酮、甜菜红素的含量均高于果肉，具有抗菌、抗炎和抗氧化作用[19-22]。火龙果果皮的综合利用程度较低，通常用于素和膳食纤维提取或作为废弃物丢弃。为了提高火龙果皮的综合利用度，研究人员开展了一系列实验，探索通过发酵提高火龙果果皮的利用率[23-27]。本研究以6种常见红皮红肉和红皮白肉火龙果为对象，对不同火龙果品种的多酚含量和抗氧化活性進行研究，为今后对火龙果皮活性成分的提取及功能的深入研究提供基础，对于提高火龙果的经济价值、拉长火龙果产业链有重要的意义。
1 材料与方法
1.1 材料
火龙果，均为食用成熟期的市售水果，具体品种为金都1号（红皮红肉，广西）、软枝大红（红皮红肉，广西）、海南蜜宝（红皮红肉，海南）、莞华白（红皮白肉，云南）、黔白1号（红皮白肉，云南）和越南1号（红皮白肉，广西）。
1.2 试剂
福林酚（分析纯）、没食子酸标准品、芦丁标准品、原花青素标准品（≥98%）（上海源叶生物科技有限公司）；无水碳酸钠、无水乙醇、亚硝酸钠、九水合硝酸铝、氢氧化钠、盐酸、三水合乙酸钠、无水甲醇和硫酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl， DPPH）（≥96%）、2，4，6-三吡啶
基三嗪（2，4，6-tripyridin-2-yl-1，3，5-triazine，TPTZ）（≥98%）、六水合氯化铁（≥99%）（上海麦克林生化科技有限公司）；2，2’-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐[2，2’-azino-bis （3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid） ammonium salt， ABTS]
（≥98%）、香草醛（≥98%）、乙酸（分析纯）（上海阿拉丁生化科技有限公司）；过硫酸钾[分析纯，优耐德引发剂（上海）有限公司]。
1.3 仪器与设备
UV-1800型紫外可见分光光度计（上海翱艺仪器有限公司）；FA1004N电子分析天平（精密度0.000 1 g，上海菁华科技仪器有限公司）；HH-6数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；DHG-9140AL电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）；CMP-TA-20L超纯水机（成都优越科技有限公司）；Sb25-I2DTDN型超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；JJ22BC型电子天平（精密度1 mg，常熟市双杰测试仪器厂）。
1.4 实验方法
1.4.1 火龙果果皮多酚的提取
选取新鲜无病虫害、表皮无破损的火龙果果皮，去掉黄绿的茎，洗净擦干后切小丁，参考文献[28]提取方法稍作修改：称取10 g火龙果于锥形瓶，按料液比1∶10 （g∶mL）加入60%的乙醇进行超声提取（超声功率为200 W、温度60 ℃、时间30 min），重复提取1次，
取滤液旋转蒸发后再用60%乙醇定容至50 mL，即得到火龙果果肉多酚提取液，4 ℃低温避光保存备用。
1.4.2 总酚含量测定
参考文献[29]，采用福林酚比法测定样品提取液的总酚浓度。配制质量浓度分别为2.5 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、7.5 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1和15.0 μg·mL-1的没食子酸标准溶液，以吸光度浓度（X1，μg·mL-1）为纵坐标，没食子酸质量（Y1）为横坐标，765 nm波长下测定吸光度，绘制没食子酸标准曲线。吸取1 mL火龙果皮多酚提取液于10 mL刻度试管中，再加入1 mL福林酚试剂和2 mL 12%的碳酸钠溶液，最后用60%乙醇定容至10 mL后，摇匀避光静置1 h，于765 nm处测试吸光度，按照没食子酸标准曲线为Y1=0.112 6X1 +0.029 7，相关系数r2=0.999 0，计算待测提取液的总酚含量。
1.4.3 总黄酮含量测定
为什么红心火龙果比白心火龙果甜 参考文献[30]，配制质量浓度分别为4 μg·mL-1、8 μg·mL-1、16 μg·mL-1、24 μg·mL-1、32 μg·mL-1和40 μg·mL-1的芦丁标准溶液，以芦丁质量浓度（X2，μg·mL-1）为横坐标，
吸光度（Y2）为纵坐标，510 nm波长下测定吸光度绘制芦丁标准曲线。用移液吸取2.0 mL火龙果皮多酚提取液到试管中，依次加入3 mL 60%乙醇溶液，0.3 mL 5%亚硝酸钠，0.3 mL 10%硝酸铝、4.0 mL 4%氢氧化钠，最后用60%乙醇定容到10 mL，摇匀放置12 min；测量510 nm波长处的吸光度，按照芦丁标准曲线为Y2=218.24X2-0.108 3，相关系数r2=0.999 5，计算待测提取液的黄酮含量。
1.4.4 原花青素含量测定
参考文献[31]，配制质量浓度为25 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、200 μg·mL-1、250 μg·mL-1和500 μg·mL-1的原花青素标准液，以原花青素质量浓度（X3，μg·mL-1）為横坐标，吸光度（Y3）为纵坐标，在546 nm的波长下测定吸光度绘制原花青素标准曲线。将1 mL火龙果皮多酚提取液、4.5 mL 3%的香草醛-甲醇溶液和4.5 mL 30%的硫酸-甲醇溶液混匀后放入30 ℃的水浴锅中，反应20 min后在546 nm的波长下测定吸光度。按照原花青素标准曲线为Y3=93.943X3-0.335，相关系数r2=0.999 2，计算待测提取液的原花青素浓度以及含量。
1.4.5 DPPH自由基清除能力测定
参照文献[32]，根据DPPH乙醇溶液呈紫，在517 nm处有强吸收，当存在抗氧化剂时，其溶液的紫变浅，吸光度降低，通过吸光度下降的程度可反映样品对DPPH自由基的清除能力。待测样液对DPPH自由基清除率（IDPPH，%）的计算公式为
（1）
式中： IDPPH为DPPH自由基清除率，%；Ao为初始溶液的吸光度；As为待测溶液的吸光度；Ar为参比溶液的吸光度。
1.4.6 ABTS自由基清除能力测定
ABTS自由基清除能力测定参照文献[32]并修改如下。精准配制7 mmol·L-1 ABTS溶液和2.45 mmol·L-1过硫酸钾溶液，将两者按比例（2∶1，V∶V）混合，于黑暗中反应12～16 h得到ABTS+储备液。使用前利用超纯水稀释ABTS+储备液，直到734 nm波长处的吸光度值为0.700±0.020。然后移取8.7 mL ABTS+稀释液与0.3 mL待测样液混合，在30 ℃黑暗条件下反应10 min。然后以超纯水为空白对照，于734 nm波长处测定其吸光度。待测样液对ABTS自由基清除率（IABTS，%）计算公式为
1 材料与方法
1.1 材料
火龙果，均为食用成熟期的市售水果，具体品种为金都1号（红皮红肉，广西）、软枝大红（红皮红肉，广西）、海南蜜宝（红皮红肉，海南）、莞华白（红皮白肉，云南）、黔白1号（红皮白肉，云南）和越南1号（红皮白肉，广西）。
1.2 试剂
福林酚（分析纯）、没食子酸标准品、芦丁标准品、原花青素标准品（≥98%）（上海源叶生物科技有限公司）；无水碳酸钠、无水乙醇、亚硝酸钠、九水合硝酸铝、氢氧化钠、盐酸、三水合乙酸钠、无水甲醇和硫酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl， DPPH）（≥96%）、2，4，6-三吡啶
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