［文章编号］ １６７１－５８７Ⅹ（２０１２）０５－０８９４－
０５［收稿日期］ ２０１２－０６－
１３［基金项目］ 吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（２００７０５２８８
）［作者简介］ 孙 录（１９５８－），男，吉林省榆树市人，副主任药师，主要从事医院药学研究。［通信作者］ 孙 录（Ｔｅｌ：０４３１－８４９９７５９４，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｕｎｌｕｇ
方法的建立及评价
孙 录１，史 磊２，吕 薇１，耿 虹３，王 华１
（１．吉林大学中日联谊医院药剂科，吉林长春１３００３３；２．吉林大学第二医院药剂科，吉林长春１３００４１；
３．吉林省食品药品检验所，吉林长春１３００３３
）［摘 要］ 目的：建立高效液相谱（ＨＰＬＣ）法测定清热通淋片中苦参碱和氧化苦参碱含量的新
方法，优化清热通淋片质量的检测和控制。方法：采用ＨＰＬＣ法。以苦参碱、氧化苦参碱标准品为对照品，清热通淋片为样品。使用Ａｇ
ｉｌｅｎｔ １２００高效液相谱仪，谱柱Ｇｅｎｉｍｉ－Ｃ１８（５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ），流动相为磷酸盐缓冲液（ｐ
Ｈ＝３．０）－甲醇（９３∶７），流速为０．８ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温为３５℃，检测波长为２２０ｎｍ，进样量为１０μＬ。通过对ＨＰＬＣ法进行线性关系、专属性、稳定性、精密度、重复性和准确度试验以进行方法学考察。结果：苦参碱回归方程为Ｙ＝１ １０２．１Ｘ＋１５．４２３，其进样量在０．３１１ ８～４．６７７ ０μｇ范围内呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９ ９），平均加样回收率为９７．１％，ＲＳＤ＝０．２４％（ｎ＝６）；氧化苦参碱回归方程为Ｙ＝１ １０６．６Ｘ＋５．０４０ ２，其进样量在０．０２９ ８～０．４４６ ４μｇ范围内呈线性关系（ｒ＝０．９９９ ６），平均加样回收率为９８．４％，ＲＳＤ＝１．５２％（ｎ＝６）。在稳定性、精密度和重复性实验中，苦参碱和氧化苦参碱的ＲＳＤ值分别为１．２１％、１．４７％；０．１３％、２．７６％；０．４８％（苦参碱和氧化苦参碱之和的ＲＳＤ）。结论：ＨＰＬＣ方法分离效果好、专属性强、简便、灵敏和准确，可作为清热通淋片中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定方法。［关键词］ 高效液相谱法；清热通淋片；苦参碱；氧化苦参碱［中图分类号］ Ｒ９２７．２；Ｒ２８４．１ ［文献标志码］ Ａ
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｍａｔｒｉｎｅ ａｎｄ ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ ｉｎ Ｑｉｎｇｒｅ Ｔｏｎｇ
ｌｉｎ ＴａｂｌｅｔＳＵＮ Ｌｕ１，ＳＨＩ Ｌｅｉ ２，ＬＶ Ｗｅｉ １，ＧＥＮＧ Ｈｏｎｇ３，ＷＡＮＧ
Ｈｕａ１
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｃｈｉｎａ－Ｊａｐａｎ Ｕｎｉｏｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ
ｃｈｕｎ １３００３３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ
ｃｈｕｎ １３００４１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｊｉｌｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ ＆Ｄｒｕｇ
Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００３３，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｍａｔｒｉｎｅ ａｎｄ ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ ｉｎ ＱｉｎｇｒｅＴｏｎｇｌｉｎ Ｔａｂｌｅｔ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ），ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｑｉｎｇｒｅ Ｔｏｎｇｌｉｎ Ｔａｂｌｅｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ．Ｍａｔｒｉｎｅ ａｎｄ ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｗｅｒｅｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ Ｑｉｎｇｒｅ Ｔｏｎｇｌｉｎ Ｔａｂｌｅｔｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｕｓｉｎｇ Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ Ｇｅｎｉｍｉ－Ｃ１８（５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ
ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＰＨ３．０）－ｍｅｔｈａｎｏｌ（９３∶７）ａｔ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ０．８ｍＬ·ｍｉｎ－１
．Ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３５℃．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２２０ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｊ
ｅｃｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅ ｗａｓ １０μＬ．Ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄ ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｒｉｎｅ ｗａｓ Ｙ＝１１０２．１Ｘ＋４
９８第３８卷 第５期
２０１２年９月吉 林 大 学 学 报 （医 学 版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．５
Ｓｅｐ
．２０１２
１５．４２３，ｓｈｏｗｉｎｇ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ（ｒ＝０．９９９ ９）ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．３１１ ８－４．６７７ ０μｇ．ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ９７．１％（ＲＳＤ＝０．２４％，ｎ＝６）．Ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ ｗａｓ Ｙ＝１１０６．６Ｘ＋５．０４０ ２，ｓｈｏｗｉｎｇｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ（ｒ＝０．９９９ ６）ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．０２９ ８－０．４４６ ４μｇ；ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ９８．４％（ＲＳＤ＝１．５２％，ｎ＝６）．Ｉｎ ｔｈｅ ｔｅｓｔｓ ｏｆ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｔｈｅ ＲＳＤ ｏｆ ｍａｔｒｉｎｅ ａｎｄ ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ １．２１％，１．４７％；０．１３％，２．７６％；０．４８％（ＲＳＤ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｍ ｏｆ ｍａｔｒｉｎｅ ａｎｄ ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｈａｓ ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ ｉｔ ｉｓｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｑｉｎｇｒｅ Ｔｏｎｇｌｉｎ Ｔａｂｌｅｔ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；Ｑｉｎｇｒｅ Ｔｏｎｇｌｉｎ Ｔａｂｌｅｔ；ｍａｔｒｉｎｅ；ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ
清热通淋片（Ｑｉｎｇｒｅ Ｔｏｎｇｌｉｎ Ｔａｂｌｅｔ，ＱＲＴＬＴ）是由爵床、白茅根、苦参、硼砂等４味药材组成，具有清热、利湿、通淋的功效。苦参为主药，具有清热燥湿、杀虫消炎利尿的功效［１］。苦参中含有苦参碱和氧化苦参碱等生物碱［２－３］，在心脑血管系统、抗肿瘤等方面有重要的药理活性［４］。原标准和文献［５］只测定苦参碱的含量，未见同时测定苦参碱和氧化苦参碱控制ＱＲＴＬＴ质量的报道，ＱＲＴＬＴ在制备过程中，由于苦参粉末和煎煮入药的工艺不同，苦参碱和氧化苦参碱的含量也有变化，本实验根据ＱＲＴＬＴ制法及工艺特点，参考相关文献［６－９］采用高效液相谱（ＨＰＬＣ）法建立了氧化苦参碱的含量测定方法，改进了苦参碱的含量测定方法，并将原标准中仅测定苦参碱修订为测定苦参碱和氧化苦参碱的总和计算含量，使样品的含量测定更为合理。
１ 材料与方法
１．１ 主要仪器及试剂
Ａｇｉｌｅｎｔ １２００高效液相谱仪（美国安捷伦公司）；ＭＩＬＬ－Ｑ纯水处理器、ＣＱＸ－１２型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。苦参碱对照品（批号为１１０８０５－２００３０６）和氧化苦参碱对照品（批号为１１０７８０－２００５０６）均为中国药品生物质品检定所提供，供含量测定用；甲醇为谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯；ＱＲＴＬＴ（批号为２０１０１０１，２０１０１０２，２０１００５０１）为江西杏林白马药业有限公司提供。
１．２ 谱条件
谱柱：Ｇｅｎｉｍｉ－Ｃ１８（５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ），以磷酸盐缓冲液（ｐＨ ３．０）－甲醇（９３∶７）为流动相，检测波长为２２０ｎｍ，流速０．８ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３５℃，进样量１０μＬ。１．３ 溶液的制备
１．３．１ 对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品１５ｍｇ、氧化苦参碱对照品８ｍｇ，分别置于１０ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再各精密量取５ｍＬ，分别置于２５ｍＬ量瓶中，用磷酸缓冲液（ｐＨ ３．０）稀释至刻度，摇匀，即得。１．３．２ 供试品溶液的制备 取ＱＲＴＬＴ粉末１．０ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入５０ｍＬ，浓氨试液１ｍＬ，密塞，称定质量，放置过夜，超声处理（功率２５０Ｗ，频率３３ｋＨｚ）３０ｍｉｎ，再称定质量，用补足其减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液２５ｍＬ，回收溶剂至干，立即取下，残渣加甲醇１ｍＬ使其溶解，转移至１０ｍＬ量瓶中，加磷酸盐缓冲液（ｐＨ ３．０）至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。１．３．３ 阴性样品对照液的制备 按处方比例，取除苦参外的其余药味，按工艺要求制成不含苦参的阴性样品，再按１．３．２中的方法制成阴性样品对照液。
２ 结 果
２．１ 专属性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品对照液各１０μＬ，分别注入液相谱仪测定，分别测得谱图（图１），结果供试品谱中，在与苦参碱和氧化苦参碱对照品谱峰相应的位置上有相应的谱峰，而阴性样品在与对照品谱峰相应的位置上无谱峰出现，说明阴性样品无干扰。
２．２ 线性关系考察
２．２．１ 苦参碱 精密称取苦参碱对照品适量，加流动相制成每１ｍＬ含０．３１１ ８ｍｇ的溶液，分别精密吸取１、３、５、１０和１５μＬ测定，以峰面积（Ｙ）对苦参碱浓度（Ｘ）进行线性回归，得回归方程Ｙ＝１ １０２．１Ｘ＋１５．４２３（ｒ＝０．９９９ ９，ｎ＝６），结果表明：苦参碱进样量在０．３１１ ８～４．６７７ ０μｇ范围内，呈良好线性关系，符合外标法定量测定的要求。
５
９
８
孙 录，等． ＨＰＬＣ法测定清热通淋片中苦参碱和氧化苦参碱含量方法的建立及评价
图１ ＨＰＬＣ谱图
Ｆｉｇ．１ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ
Ａ：Ｍａｔｒｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ：Ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｃ：Ｔｅｓｔ ｓａｍｐｌｅｓ；Ｄ：Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ．
２．２．２ 氧化苦参碱 精密称取氧化苦参碱对照品适量，加流动相制成每１ｍＬ含０．０２９ ７６ｍｇ的溶液，分别精密吸取１、３、５、１０和１５μＬ测定，以峰面积（Ｙ）对苦参碱浓度（Ｘ）进行线性回归，得回归方程Ｙ＝１ １０６．６Ｘ＋５．０４０ ２（ｒ＝０．９９９ ６，ｎ＝６），结果表明：苦参碱进样量在０．０２９ ８～０．４４６ ４μｇ范围内，呈线性关系，符合外标法定量测定的要求。
２．３ 稳定性试验
精密吸取供试品溶液１０μＬ，在０、２、４、６、９及１２ｈ测定苦参碱和氧化苦参碱峰面积值，结果苦参碱的相对标准差（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ，ＲＳＤ）为１．２１％，氧化苦参碱ＲＳＤ＝１．４７％（ｎ＝６），表明供试品溶液在１２ｈ内稳定性良好。
２．４ 精密度试验
精密吸取供试品溶液１０μＬ，按上述谱条
件，连续测定６次，结果其中苦参碱ＲＳＤ为０．１３％，氧化苦参碱ＲＳＤ为２．７６％（ｎ＝６），表明仪器的精密度良好。
２．５ 重复性试验
按１．３．２项下方法平行制备６份供试品溶液，分别取１０μＬ进样测定，结果氧化苦参碱和苦参碱之和的平均含量为１．１ｍｇ／片（ＲＳＤ＝０．４８％，ｎ＝６），表明本法的重复性良好。
２．６ 准确度试验
２．６．１ 苦参碱 取ＱＲＴＬＴ（苦参碱的含量为２．６８１ｍｇ·ｇ－１）０．５ｇ共６份，精密称定，置于已经分别精密加入对照品溶液（０．３１１ ８ｇ·Ｌ－１）２．１ｍＬ（挥干溶剂）的具塞
锥形瓶中，按１．３．２项下方法制成６份供试品溶液，按上述谱条件进行测定，计算加样回收率，符合定量分析的要求。见表１。
表１ 苦参碱回收率试验结果
Ｔａｂ．１ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｔｅｓｔ ｏｆ ｍａｔｒｉｎｅ（ｎ＝６）
Ｎｏ．Ｓａｍｐｌｅ
（ｍ／ｇ）
Ｍａｔｒｉｎｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ
（ｍ／ｍｇ）
Ｍａｔｒｉｎｅ ａｄｄｅｄ
（ｍ／ｍｇ）
Ｍａｔｒｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ
（ｍ／ｍｇ）
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ
（η／％）
Ａｖｅｒａｇｅ
（η／％）
ＲＳＤ
（η／％）
１ ０．５０３１ １．３４９ １．３４７ ２．６５８ ９７．２
２ ０．５０１５ １．３４５ １．３４７ ２．６４９ ９６．８
３ ０．５０４０ １．３５１ １．３４７ ２．６６２ ９７．３
４ ０．４９６１ １．３３０ １．３４７ ２．６３７ ９７．０ ９７．１ ０．２４５ ０．４９３１ １．３２２ １．３４７ ２．６３３ ９７．３
６ ０．５００１ １．３４１ １．３４７ ２．６４５ ９６．８
２．６．２ 氧化苦参碱 取ＱＲＴＬＴ（氧化苦参碱的含量为０．２６１ｍｇ·ｇ－１）０．５ｇ共６份，精密称定，置已分别精密加入对照品溶液（０．０２９ ７６ｇ·Ｌ－１）２．５ｍＬ（挥干溶剂）的具塞锥形瓶中，按１．３．２项下方法制成６份供试品溶液，按上述谱条件进行测定，计算加样回收率，符合定量分析的要求。结果见表２。
２．７ 样品测定
按上述谱条件和含量测定方法，精密测定３批样品，记录峰面积，计算每片含量。见表３。
６
９
８吉林大学学报（医学版） 第３８卷 第５期 ２０１２年９月
表２ 氧化苦参碱回收率试验结果
Ｔａｂ．２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｔｅｓｔ ｏｆ ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ（ｎ＝６）
Ｎｏ．Ｓａｍｐｌｅ（ｍ／ｇ）
Ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ
ｏｒｉｇｉｎａｌ（ｍ／ｍｇ）
Ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ
ａｄｄｅｄ（ｍ／ｍｇ）
Ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ（ｍ／ｍｇ）
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ
（η／％）
Ａｖｅｒａｇｅ
（η／％）
ＲＳＤ
（η／％）
１ ０．５０３１ ０．１３１ ０．１９４ ０．３２１ ９７．８
２ ０．５０１５ ０．１３１ ０．１９４ ０．３２０ ９７．２
３ ０．５０４０ ０．１３２ ０．１９４ ０．３２３ ９８．５
４ ０．４９６１ ０．１２９ ０．１９４ ０．３１７ ９６．９ ９８．４ １．５２５ ０．４９３１ ０．１２９ ０．１９４ ０．３２５ １０１．０
６ ０．５００１ ０．１３１ ０．１９４ ０．３２３ ９９．０
表３ 样品含量测定结果
Ｔａｂ．３ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ
（ｍ／ｍｇ）
史磊
Ｌｏｔ Ｎｏ．Ｍａｔｒｉｎｅ ＯｘｙｍａｔｒｉｎｅＳｕｍ ｏｆ ｍａｔｒｉｎｅ ａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ
２０１０１１０１ １．０４ ０．１０ １．１４
２０１０１１０２ １．０２ ０．１１ １．１３
２０１１０５０１ １．０２ ０．１１ １．１３
３ 讨 论
３．１ 检测波长的选择
取苦参碱和氧化苦参碱对照品溶液分别测定其紫外吸收光谱，根据其最大吸收波长，同时参考文献［１０－１２］，并考虑测定时样品的稳定性，故选定检测波长为２２０ｎｍ。在选定条件下，苦参碱与氧化苦参碱和样品中其他组分谱峰可基线分离。
３．２ 流动相的选择
①乙腈－０．１％磷酸二氢钾溶液（每１ ０００ｍＬ含磷酸１．６ｍＬ，三乙胺０．４ｍＬ）（３∶９
７）（原ＱＲＴＬＴ含量测定用流动相）；②乙腈－水（６．８０ｇ的磷酸二氢钾＋１．０１ｇ的庚烷磺酸钠→１ ０００ｍＬ水中，三乙胺ｐＨ值调至７．０）（１８∶８２）（原ＱＲＴＬ胶囊含量测定用流动相）；③磷酸盐缓冲液（ｐＨ３．０）－甲醇（９３∶７）为流动相。磷酸盐缓冲液制法：取３．４０２ｇ磷酸二氢钾溶解于１Ｌ超纯水中，用磷酸调ｐＨ至３．０。结果表明：使用流动相③平衡时间最短，分离效果最好；使用流动相①、②也可使供试品溶液较好分离，但三乙胺对谱柱损害较大，会降低谱柱的使用寿命。
３．３ 供试品提取纯化条件的选择
根据苦参碱和氧化苦参碱的溶解性能，并参考有关文献［１３－１４］采用了４种方法进行提取纯化。最终选取如下方法：取本品粉末１．０ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入５０ｍＬ，浓氨试液１ｍＬ，密塞，称定质量，放置过夜，再进行超声处理。因为放置过夜后制备的供试品含量高于未放置过夜、直接超声或回流提取的供试品，而且超声的方法比回流法更为简便，故采取“放置过夜、再超声处理”的供试品溶液的制备方法。
本实验根据ＱＲＴＬＴ制法及工艺特点（苦参三分之二粉碎，三分之一水煎煮入药，粉末中含氧化苦参碱的较多），改进了含量测定方法，并将原标准中仅以苦参碱计算含量，修订为以苦参碱和氧化苦参碱的总和计算，使样品的含量测定更为合理。根据ＱＲＴＬＴ制法、工艺、处方量及制成量，暂定为本品
每片含苦参碱和氧化苦参碱的总量不得少于１．０ｍｇ。本方法可以较好地实现ＱＲＴＬＴ的质量控制。
［参考文献］
［１］江苏新医学院．中药大辞典（上册）［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９８６：１２８３．
［２］全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编（上册）［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９９６：５２９．
［３］王 宇．苦参化学、工艺、制剂及质量研究近况［Ｊ］．中成药，１９９７，１９（４）：３９．
［４］陈曙霞．苦参生物碱的药理研究进展［Ｊ］．中成药，２００３，２５（１）：７５．
［５］刘 明．ＨＬＰＣ法测定清热通淋片中苦参碱的含量［Ｊ］．中国中医药，２０１０，８（２）：１５９．
［６］毛 丹，陈 钶，王 柯，等．ＨＰＬＣ法测定苦参软膏中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱［Ｊ］．中成药，２０１１，３３（９）：１５３１－１５３４．
［７］刘 莹，孟庆妍，翟宏宇．ＨＰＬＣ法同时测定复方苦参肠炎康片中苦参碱和氧化苦参碱的含量［Ｊ］．长春中医药大学学
报，２０１１，２７（５）：８４２－８４３．
［８］邹继红，王宏斌，赵春杰．ＨＬＰＣ测定何日呼－５中的氧化苦参碱［Ｊ］．华西药学杂志，２０１２，２７（１）：１０４－１０５．
［９］叶秀全，宋粉云．ＨＰＬＣ法测定清肺抑火丸中苦参碱和氧化苦参碱的含量［Ｊ］．中国药房，２０１１，２２（１２）：１１２７－１１２９．［１０］汪文来，赵红霞，贾海骅．ＨＰＬＣ法测定不同产地苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量［Ｊ］．中国中医基础杂志，２００７，１３（１０）：７９９－８００．
［１１］张成颖，弥 宏，赵宏峰，等．ＨＰＬＣ测定前列康泰胶囊中
７
９
８
孙 录，等． ＨＰＬＣ法测定清热通淋片中苦参碱和氧化苦参碱含量方法的建立及评价
苦参碱与氧化苦参碱［Ｊ］．华西药学杂志，２０１０，２５（４）：４７６－
４７７．［１２］陈 黎，王永惠，黄良永．ＨＰＬＣ法测定妇安消疹洗液中苦
参碱与氧化苦参碱的含量［Ｊ］．中国药师，２０１２，１５（２）：２１７－
２１９．［１３］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．２０１０
年版．北京：中国医药科技出版社，２０１０：１８８，９１５．［１４
］胡森科，于 燕，苗江丽．治带片中苦参碱及氧化苦参碱的ＨＰＬＣ法测定［Ｊ］．西安交通大学学报：医学版，２００７，２８（３）：３４３－
３４５．腔内激光结合泡沫硬化杂交手术在日间手术模式中应用的可行性
湖北医药学院附属太和医院血管外科（湖北十堰４４２０００
） 潘俊峰，周 科，张丹峰，王 耕本文作者对２００９年４月起本科采用３种不同方法的１８０例大隐静脉曲张患者的疗效进行比较，现报道如下。１ 资料与方法
１．１ 入组条件 选取按修订后的ＣＥＡＰ分级中Ｃ２～Ｃ４单侧肢体的静脉曲张，预计手术时间不超过９０ｍｉｎ，无明显心肺异常，年龄≤６０岁的患者。排外硬化剂注射史及浅静脉手术史、妊娠、正在接受抗凝（口服小剂量的阿司匹林可以除外）
、有明确的恶性肿瘤病史及结缔组织疾病患者。所有患者均通过下肢深静脉顺行造影或彩超检查证实深静脉通畅。所选患者共１８０例，其中男性１１４例，女性６６例；左侧肢体１０５例，右侧肢体７５例；其中Ｃ２ ６９例，Ｃ３ ８０例，Ｃ４ ３１例；年龄２１～５８岁。将所选患者随机分为３组：应用静脉腔内激光结合泡沫硬化的杂交手术组、单纯静脉腔内激光组和静脉曲张剥脱手术组，３组患者年龄、性别、患肢、病程时间及ＣＥＡＰ临床分级比较差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５），具有可比性。
１．２ 方式 术前常规行下肢深静脉血管超声检查，准备合适型号的弹力袜（型，压力２０～３０ｍｍＨｇ）备用。静脉曲张剥脱手术：①术前用记号笔标记下肢曲张静脉及功能不全的交通支静脉；②由踝关节自大隐静脉主干向远心端插入剥脱器至膝上，切口、剥脱主干大隐静脉；常规结扎大隐静脉注入股静脉前的５条属支（部分有变异），高位结扎并切断大隐静脉主干；③自大隐静脉主干向远心端插入剥脱器至膝上，切口、剥脱主干大隐静脉；④膝下大隐静脉及分支曲张血管分段切口、剥脱；⑤逐一缝合切口后包扎，术毕用弹力绷带包扎患肢２周。单纯静脉腔内激光：①同上；②内踝上方１～２ｃｍ处，用１８号带套管针穿刺踝部段大隐静脉，退出针芯后，置入导丝，顺行导入４Ｆ或５Ｆ
血管短鞘，再通过血管鞘，在导丝的指引下，插入４Ｆ或５Ｆ直形导管至腹股沟韧带下方或大腿上段，退出导丝后，从导管中插入激光光纤。③设定激光发射功率为１２Ｗ，每个脉冲时间为１ｓ，间隔１ｓ。一边发射激光，一边将导管和光纤同步缓慢后撤，在脚踏开关控制下，一个脉冲后撤距离０．５～１．０ｃｍ左右。这时，另一术者用手沿红外光闪烁标志处加压，使静脉壁收缩闭合，直至踝关节水平。④膝下大隐静脉及分支曲张血管同上处理；⑤术毕用弹力绷带包扎患肢２周。静脉腔内激光结合泡沫硬化的杂交手术：①同单纯静脉腔内激光组，不同的是激光至膝关节水平；②取２ｍＬ １％的聚桂醇（中国陕西天宇制药有限公司）溶液加８ｍＬ空气经充分混合成１０ｍＬ泡沫硬化剂，现用现配制（Ｔｅｓｓａｒｉ法）。注射用头皮针在曲张静脉处选择远心端穿刺回抽有血后注射２ｍＬ泡沫硬化剂，根据术前标记，分３～６次（点）注射，注射后以曲张静脉塌陷，局部触之有握雪感为最佳；③术毕用弹力绷带包扎患肢２周。
１．３ 观察指标 将手术当日需注射或口服止痛剂的定义为疼痛病例；将患者可下床且无明显跛行的时间定义为下床时间。比较３组患者的手术时间、下床时间、疼痛例数以及应用静脉腔内激光结合泡沫硬化的杂交手术组和单纯静脉腔内激光组２组患者局部并发症（浅静脉炎及皮肤灼伤）的发生率。２ 结果与讨论
所有的患者术后均恢复正常的生活自理或工作，取得满意的疗效。本研究中激光结合泡沫硬化杂交手术的手术时间平均为（２３．６±５．２）ｍｉｎ，与单纯静脉腔内激光手术时间（２４．７ｍｉｎ±
４．５ｍｉｎ）无明显差别，但较传统的静脉剥脱术（４３．４ｍｉｎ±６．４ｍｉｎ）明显缩短（Ｐ＜０．０５）；应用静脉腔内激光结合泡沫硬化的杂交手术组下床时间［（５．２±１．３）ｈ］较单纯静脉腔内激光组［（６．８±１．７）ｈ］和传统的静脉剥脱术组［（９．４±２．５）ｈ］明显提前（Ｐ＜０．０５）；静脉曲张剥脱手术组疼痛发生率（３８．３３％）高于另外２组（２０％，２０％，均Ｐ＜０．０５）；应用静脉腔内激光结合泡沫硬化的杂交手术组术后并发症的发生率（１３．３３％）低于单纯静脉腔内激光组（３０．００％，Ｐ＜０．０５）。本组结果显示：激光结合泡沫硬化杂交手术从上述方面比较均有较大的优势，手术时间、术后下床时间、疼痛发生和局部并发症等方面比较，更符合日间手术的离院标准；且手术操作简单易学，麻醉可应用局部麻醉、硬脊膜外麻醉、腰麻等多种方式，对门诊和中心手术室均能适应，值得大力推广。
本研究作为大隐静脉手术在日间手术模式中手术方法选择的探索性尝试，结果表明：激光结合泡沫硬化杂交手术优势表现明显，符合日间手术模式下运作。但因目前国内医疗机构本身对日间手术的态度、院外护理质量、麻醉科和不同手术科室的协作以及医疗和法律环境等因素的制约，可能影响激光结合泡沫硬化杂交手术在日间手术中的应用和推广。
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９８吉林大学学报（医学版） 第３
８卷 第５期 ２０１２年９月
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